Андрей Евгеньевич Быков (Иван Охлобыстин) — заведующий терапевтическим отделением больницы и руководитель интернатуры четырёх интернов. Является опытным специалистом, в больнице на хорошем счету. В медицинских вопросах принципиален. Доктор с чувством юмора, хотя, как правило, резок и бескомпромиссен. Часто ироничен до сарказма, колок и язвителен. Картавит. С педагогической целью создает для интернов нелепые ситуации, в которые они по неопытности и попадают. Однако сразу же указывает интернам на ошибки и исправляет их. В качестве наказания часто оставляет интернов на ночные дежурства. Холост. О личной жизни Быкова известно мало, за исключением редких случаев общения с главврачом больницы Анастасией Кисегач. В одной из серий доктор Купитман намекает на то, что у Быкова были связи с медсестрой-блондинкой и патологоанатомом; а бывший учитель Быкова и Кисегач академик Таланов в 37-й сериии с сожалением говорит, что они были завидной парой. В 35 серии упоминается, что до 2002 года Быков был неформалом (появляется в кадре в косухе), ездил на мотоцикле и любил выпить. Слушает «Нирвану». Хобби — компьютерные игры и приставки, в основном, симуляторы футбола.
Семён Робертович Лобанов (Александр Ильин) — интерн. Простой парень, отслужил в армии. С первого курса работал на скорой помощи и поэтому считает себя достаточно опытным специалистом — его задевают замечания о неопытности. Однако в неотложных ситуациях не теряется, действует четко и быстро (в 24 серии оказывает больному с остановкой сердца реанимационные мероприятия и спасает ему жизнь). Из-за высокого самомнения, обычно не подкрепленного знаниями, чаще других попадает в самые смешные ситуации. Всё время не высыпается и не имеет денег, поэтому частенько «стреляет» сигареты и деньги у коллег. Женат на девушке-юристе по имени Ольга. Склонен к авантюрам, легко соглашается за деньги совершить для пациентов действия, нарушающие больничный режим, а иногда и противоправные действия. Однако крайне недальновиден, из-за чего его авантюры оканчиваются крахом. Сторонник силового метода разрешения конфликтов, умеет «наехать». Занимался боксом. Компанейский. Азартен. Заядлый курильщик. С пациентами общается «по-свойски», почти со всеми на «ты».
Борис Аркадьевич Левин (Дмитрий Шаракоис) — интерн с красным дипломом. Считает себя самым умным и эрудированным по сравнению с другими интернами и часто демонстрирует это, поэтому бывает заносчив. Мечтает стать великим учёным и получить Нобелевскую премию. Организованный, опрятный, свои «мудрые мысли» и наблюдения записывает на диктофон. Самый чувствительный и впечатлительный, часто обижается из-за насмешек Быкова и других интернов. Хорошо знает теорию медицины и латынь, но в случае возникновения чрезвычайных ситуаций теряется. Пренебрежительно относится к работе младшего и среднего медперсонала (вынос уток, перевязки), так как считает это ниже достоинства врача. У него роман с медсестрой Любовью Михайловной, который его одновременно и радует, и пугает: ему нравится секс, но он опасается серьёзности намерений медсестры. Как и другие интерны, боится Быкова. Хорошо играет в шахматы.
Глеб Викторович Романенко (Илья Глинников) — интерн. Сын главврача больницы Анастасии Кисегач, поэтому убеждён, что интернатура для него должна проходить без проблем, несмотря на то, что медицина, как и любая работа — абсолютно не его призвание. Классический «мажор» — поступил в медицинский ВУЗ и учился там благодаря связям матери, в интернатуру также попал по блату. Завсегдатай клубов и тусовок (несмотря на это плохо переносит спиртное), ездит на черном Рэндж Ровере (10 серия), подаренном отцом, к девушкам относится потребительски. Однако по ходу сериала у Романенко возникает роман с Варей Черноус, которая поначалу не принимала его ухаживания. Чаще других ведет себя вызывающе и конфликтует с Быковым, который возмущен «мажорским» поведением интерна, убежденного во вседозволенности. Однако не лишен чувства юмора, может подшутить над остальными интернами или навести на них гнев Быкова, отчего и сам страдает. В ухаживаниях за Варей Черноус проявляет изобретательность. Носит фамилию отца, с которым Киcегач в разводе.
Варвара Николаевна Черноус (Кристина Асмус) — интерн. Сердобольная и сочувствующая. Правдоруб, идеалист, не любит несправедливость и борется с ней всеми силами. Исполнительна, к заданиям Быкова подходит со всей серьезностью, иногда слишком инициативна. Её не пугают маленькая зарплата и неприятные обязанности вроде выноса уток за больными, считает их неотъемлемой частью лечебного процесса. Старается помочь всем и каждому, но от этого часто страдает сама. Обидчива, чувствительна. Жила без отца, с мамой, которая ей внушала, что мужчина в жизни женщины — не главное; на первом курсе обучения пережила любовную драму, поэтому поначалу не принимает ухаживания Романенко, но затем уступает, и у них начинается роман.
Иван Натанович Купитман (Вадим Демчог) — доктор-дерматовенеролог, заведующий кожно-венерологическим отделением больницы. «Я венеролог, уролог, гинеколог, сексопатолог и черта в ступе!» Лучший друг Быкова, с удовольствием поддерживает его, когда тот разыгрывает интернов. Умён и хитёр, но чаще — ловелас и увлекающаяся личность. В работе считает себя жрецом богини любви Венеры, так как лечит больных, от нее пострадавших. В жизни — бытовой философ, в связи с чем многие ходят к нему за советами по личным вопросам, которые не всегда помогают, а иногда приводят к неожиданному результату. Любитель и ценитель коньяка, а также других алкогольных напитков, которые появляются у него от пациентов в качестве благодарности за лечение, хорошие результаты анализов или от коллег за консультацию (в том числе по личным вопросам). В результате имеет большую коллекцию коньяка у себя в кабинете. Был женат трижды, на данный момент — холост.
Любовь Михайловна Скрябина (Светлана Пермякова) — старшая медсестра терапевтического отделения. Опытна, исполнительна, но любвеобильна и болтлива. Четко и быстро реагирует на любые ситуации, восклицая: «Едрит-Мадрид!». Обычно в курсе всех сплетен, часто обсуждаемых с медсестрой Галей. У нее хорошие отношения с интерном Варей Черноус, которой она часто помогает, проявляя женскую солидарность. Восхищается заведующим отделением Быковым (в 7 серии отчетливо видно, что в шкафу на посту старшей сестры стоит фотография Быкова в рамочке), по-женски жалеет интерна Левина, с которым у неё в итоге начинается «роман». С жалобами на жизнь и за советом ходит к доктору Купитману.
Анастасия Константиновна Кисегач (Светлана Камынина) — главный врач больницы. Опытная, решительная, хотя и эмоциональная. Хороший руководитель. Как правило, находит выход из любой сложной ситуации. Владеет различными методами воздействия на подчиненных, в том числе и на Быкова. К Быкову со студенческих лет испытывает противоречивые чувства. С одной стороны, Быков постоянно ее злит, так как не всегда ей подчиняется, часто спорит и противоречит, недоволен интернами, направленными к нему Кисегач. Но каждый раз, выпив с Быковым, она оказывается с ним в постели, после чего решительно заявляет «Запомни, Быков: это было в последний раз!», на что Быков скептически замечает «Ну да…» (17-я серия). Давно в разводе, сын — интерн Глеб Романенко.

Ольга Лобанова (Татьяна Лянник) — жена интерна Семёна Лобанова. По образованию юрист с красным дипломом. В 24,25 сериях — пациентка клиники (обследование по поводу планирования семьи).
Галя (Елена Суркова) — медсестра терапевтического отделения.
Вера (Татьяна Мухина) — секретарь главврача.
Пластический хирург Борис Ефимович (Святослав Насташевский) — один из подчиненных главного врача, пластический хирург (в 17-м эпизоде обсуждает с Кисегач операцию по увеличению груди).
Академик Валерий Николаевич Таланов (Юрий Ильин) — выдающийся ученый, терапевт, в прошлом — учитель Быкова и Кисегач, появляется в 37 серии в качестве одного из организаторов крупной научной медицинской конференции.
Федя (Станислав Эвентов) — водитель скорой помощи, бывший ухажер Любы, с которым они расстались год назад из-за его пристрастия к спиртному. Появляется в 31,32 сериях в надежде вновь завоевать Любу.
Санитары (Максим Артамонов, Михаил Павлик) — возят на каталках больных, медицинские материалы, трупы в морг; ловят психически неуравновешенных больных. Один из санитаров даже в воспитательных целях работал извозчиком Быкова (2 серия).